PEMERIKSAAN GOLONGAN DARAH PADA RAMBUT

PENDAHULUAN

Rambut manusia memiliki potensi yang signifikan dalam ilmu forensik dan telah banyak digunakan dalam penyelidikan forensik. Peneliti percaya bahwa penggunaan rambut dapat mengaitkan tersangka terhadap korban atau tersangka / korban terhadap TKP terutama karena rambut dapat ditransfer dari tersangka kepada korban dan / atau sebaliknya selama kontak fisik. Jenis-jenis rambut, kondisi dan jumlah rambut yang ditemukan di TKP semuanya memiliki relevansi besar sebagai bukti dalam investigasi kriminal.

Ahli forensik secara rutin membandingkan karakteristik morfologi dari sampel rambut tersebut terhadap sampel rambut yang dikenal untuk menentukan transfer. Rambut manusia juga telah berhasil digunakan untuk menilai penyalahgunaan narkoba dan zat yang tidak dapat  terdeteksi dalam cairan tubuh. Menggunakan teknik analisis yang sangat canggih seperti immunoassay dan kromatografi gas, peneliti kini ekstensif menggunakan rambut manusia untuk memecahkan kasus keracunan dan penyalahgunaan obat dan zat.

Rambut dapat didefinisikan sebagai pertumbuhan filamen kulit yang tipis dan terutama terdiri dari keratin. Sangat berbeda dengan spesies hewan lainnya berdasarkan panjang, warna, bentuk, penampilan akar dan karakteristik morfologi. Ada juga ketentuan umum variabilitas dalam jenis rambut yang ditemukan pada tubuh hewan tertentu. Pada manusia, rambut terdistribusi di kepala, daerah kemaluan, tangan, kaki, dan bagian tubuh lainnya.

PEMERIKSAAN GOLONGAN DARAH PADA RAMBUT 

CARA PEMERIKSAAN RAMBUT

Pada pemeriksaan rambut haruslah di perhatikan hal- hal pokok sebagai  berikut :

  1. Struktur rambut

Disini ditentukan terlebih dahulu apakah yang di periksa itu benar-benar rambut atau hanya serat lain.

  1. Bila benar rambut, hendaknya diselidiki asalnya, ataukah rambut manusia atau binatang.
  2. Bila rambut berasal dari manusia, hendaknya dapat ditentukan:

–  Suku bangsa ( Ras)

–  Jenis kelaminnya

–  Situasi dan hal-hal lain suatu kejadian

  1. Apakah kejadian ada hubungan dengan kejahatan
  2. Bila rambut jenazah, kemungkinan dapat ditentuksan namanya sesudah kematian.

 

  1. STRUKTUR RAMBUT

Rambut merupakan polimer biologis dengan lebih dari sembilan puluh persen terdiri dari protein keratin. Keratin merupakan protein sistin, yang membentuk dua kelompok besar yang disebut protein filamen menengah dan protein terkait filamen menengah (Powell et al. 1991) yang banyak pada sebagian besar rambut. Dari beberapa jenis ikatan protein yang menstabilkan molekul keratin, yang paling berbeda adalah –S-S-. Ikatan -S-S ini dibentuk oleh dua residu sistin yang terkandung dalam rantai polipeptida yang berdekatan dan ikatan disulfida ini yang terutama bertanggung jawab untuk ketahanan keratin terhadap kehancuran. Penelitian mengenai penjelasan gen yang mengkode protein struktural dari folikel rambut manusia telah maju pesat selama dekade terakhir dan perkembangan yang signifikan dibuat di kedua karakterisasi keratin rambut manusia, serta protein keratin rambut terkait. Rogers et al. (2006) memberikan tinjauan yang bersangkutan dari protein keratin yang ditemukan di rambut manusia.

Gambar 1. Diagram rambut manusia

Folikel rambut manusia merupakan struktur yang terbentuk sebagai hasil dari interaksi epitel-mesenkim dimulai sekitar bulan ketiga perkembangan janin. Hal ini sangat kompleks, yang terdiri dari lebih dari dua puluh jenis sel berbeda yang didistribusikan ke enam bidang utama. Daerah ini meliputi selubung jaringan ikat, papilla dermal, selubung akar luar, selubung akar dalam, batang rambut dan kelenjar sebasea. Kompleks rambut ini berperilaku dalam pola unik mamalia, setelah tahap produksi rambut, berinvolusi in situ sebelum memasuki fase istirahat setelah memperbaharui secara siklus. Folikel rambut sepenuhnya dikendalikan oleh kulit dengan kontrol hormonal sendiri, jaringan autokrin dan parakrin sendiri dan siklusnya, muncul sebagai struktur yang sangat kompleks dan stabil yang merangkum aturan utama homeostasis jaringan (Bernard 2005 ). Akibatnya, studi histo-fisiologi folikel rambut sekarang sangatlah penting (Barinov dan Sulaeva 2004).

           Secara struktural, rambut terdiri dari:

  1. a) korteks dalam yang terdiri dari sel-sel berbentuk gelendong, dan
  2. b) selubung luar yang disebut kutikula.

Setiap sel kortikal terdiri dari banyak fibril. Di antara fibril, bahan matriks tumbuh dari folikel rambut. Fibril membentuk sumbu serat. Kutikula terdiri dari skala berbentuk lapisan dan bertanggung jawab untuk banyak kekuatan mekanik dari serat rambut. Kutikula terdiri dari sejumlah lapisan, yang bervariasi dari satu spesies ke spesies lain. Yang khas rambut manusia  memiliki enam sampai delapan lapisan kutikula.

Kutikula (cutikula) adalah zona yang paling luar terdiri dari sisik-sisik keratin dan mempunyai bentuk yang tertentu. Pada manusia sisik-sisik itu rata (flat). Korteks (Cortex) adalah bagian dari zona tengah dengan ketebalan yang bermacam-macam dan terdiri dari serat-serat keratin yang memanjang dan  mengandung bentuk yang tertentu. Inilah yang memberikan warna pada rambut.

Medulla (medullary canal,central shaft) adalah zona yang paling dalam. Pada  binatang bagian ini terdiri dari  banyak benar zat pigmen. Medulla ini biasanya sempit, kadang-kadang tidak ada atau terputus-putus. Akar rambut mempunyai bentuk yang serupa dengan rambut, kecuali bentuknya lebih besar. Ujung rambut melancip dan biasanya non medullated.  Pada serat (fiber) tidak didapati kutikula sama skali, terutama serat sintetik biasanya homogen. Pada pemeriksaan mikroskopik, penampung melintang serat tidak mempunyai kutikula dan tidak ada bentuk yang dapat diperbandingkan dengan rambut.

  1. PEMERIKSAAN ASAL RAMBUT

Dari rupa kutila dan medulla, bentuk relatif dari medulla dan korteks dan dari penampang-penampang melintang dari pada rambut, dapatlah diduga asal rambut. Disini dicantumkan perbedaan rambut manusia dan rambut binatang.

Tabel 1. Perbedaan rambut manusia dan rambut hewan    

  1. PEMBENTUKAN DAN PERTUMBUHAN RAMBUT

Pembentukan rambut dimulai pada bulan ketiga kehidupan janin. Setiap rambut tumbuh melalui folikel dan terdiri dari sel-sel epidermis yang tumbuh di bawah dermis. Awalnya epidermis menebal dan sel-sel mulai tumbuh ke dalam dermis. Pertumbuhan ini turun membentuk kumpulan beberapa jaringan ikat untuk menciptakan papila dimana sel berkembang biak untuk membentuk rambut. Sel-sel ini mendorong kanal tengah batang rambut dan menjauhi sumber makanan, sehingga menyatu dengan keratin. Morfogenesis rambut mengikuti pola siklik proliferasi dan diferensiasi sel dimulai pada pertengahan hingga akhir perkembangan embrio dan diulang sepanjang hidup (Orwin 1979). Akibat rambut menjalani pertumbuhan siklus, fase perantara dan istirahat, karakteristik morfologi rambut terlihat di bawah mikroskop cukup untuk menentukan fase pertumbuhan rambut.

  1. TAHAP SIKLUS RAMBUT

Setiap rambut melewati tiga tahap yang berbeda yaitu anagen, catagen dan telogen. Anagen adalah periode diferensiasi folikel aktif dan pertumbuhan rambut. Pada akhir fase ini, ada fase peralihan singkat disebut catagen yang kemudian mengarah ke tahap aktif disebut sebagai telogen. Selama fase telogen, rambut sepenuhnya terbentuk masih dipertahankan dalam folikel rambut. Pada manusia, fase anagen berlangsung selama tiga sampai lima tahun, fase catagen selama beberapa minggu dan fase telogen selama dua bulan (Stene 2004). Namun, meskipun struktur dan histologi rambut telah diketahui, peristiwa molekuler mengendalikan siklus rambut tetap tidak jelas (Bernard 1994). Namun demikian, banyak penelitian saat ini sedang dilakukan di berbagai aspek dari siklus rambut (misalnya Bayer-Garner et al 2002;. Paus and Foitzik 2004). 

Studi morfologi daerah akar rambut menentukan fase pertumbuhan.  80-90 persen dari folikel rambut dari rambut kepala individu yang sehat berada dalam fase anagen, sementara hanya dua persen berada dalam fase catagen dan sisanya 10-18 persen berada dalam fase telogen. Fase anagen rambut baru dimulai pada saat rambut baru mulai tumbuh. Selama ini ada pertumbuhan yang sangat aktif dalam pangkal rambut dan bahan disimpan dalam batang rambut oleh sel-sel yang ditemukan di folikel. Medula, korteks, kutikula, dan selubung akar yang menyertainya dibentuk oleh sel-sel aktif  metabolik disebut di atas dan di sekitar papilla dermal folikel yang tumbuh ke atas selama fase ini. Melanin rambut diproduksi di pangkal rambut sepanjang fase ini dari siklus rambut. Fase istirahat singkat atau fase catagen mengikuti fase anagen. Tidak ada pigmen dibuat selama fase ini dan folikel berhenti memproduksi rambut.

Pada fase telogen, folikel ini tidak aktif. Ini adalah waktu ketika rambut baru mulai tumbuh dari folikel rambut. Karena tumbuh ke atas rambut lama akan ditumpahkan secara alami atau mungkin ditarik keluar, yang terjadi dengan mudah dan tanpa rasa sakit. Rambut yang sudah lama adalah rambut yang keluar ketika seseorang menyisir rambut. Pada satu waktu, sekitar satu dari sepuluh folikel di kepala individu berada dalam tahap shedding. Setelah rambut mencapai fase telogen, folikel mencapai kematangan, tahap stabil dan rambut berada di  folikel hanya dengan kelompok akar rambut. Fase anagen dibentuk oleh sel germinal bawah akar ini. Penggantian rambut kepala manusia tidak memiliki pola musiman yang jelas, melainkan terjadi secara mosaik yang tersebar. Jangka waktu rata-rata pertumbuhan kulit kepala rambut adalah sekitar seribu hari dengan fase istirahat berlangsung selama sekitar seratus hari. Sekitar sepuluh persen dari rambut kepala manusia dalam fase telogen, dan jumlah minimal tarikan rambut seperti menyisir -diperlukan untuk mengusir rambut dari folikel aktif. Rambut baru muncul dari pembukaan yang sama di permukaan kulit yang lama, dan siklus rambut dimulai lagi. 

  1. FAKTOR YANG MEMPENGARUHI PERTUMBUHAN RAMBUT

Rambut tumbuh kira-kira pada kecepatan rata-rata 10 cm / tahun (0,3 mm / hari). Kondisi kesehatan dan nutrisi yang baik adalah penting untuk pertumbuhan rambut sehat. Malnutrisi, kurang gizi dan anemia memiliki pengaruh yang kuat pada pertumbuhan rambut. Mineral tertentu, vitamin, hormon dan elemen juga sangat penting untuk pertumbuhan rambut normal. Tingkat androgen merupakan  factor pertumbuhan rambut lainnya yang penting (Itami dan Inui 2005). Estrogen, di sisi lain, memperlambat pertumbuhan rambut selama masa pertumbuhan. Sebuah tinjauan saat ini dengan Conrad dan Paus (2004) memberikan wawasan terhadap efek estrogen pada siklus folikel rambut, reseptor estrogen pada kulit, dan fungsi potensi estrogen dalam biologi rambut. Pada masa pubertas rambut vellus yang imatur di tubuh berubah menjadi rambut terminal. Perubahan ini disebabkan baik karena adrenal dan gonad androgen yang memberi efek biologis melalui reseptor androgen, faktor transkripsi sel modulasi  transkripsi sebagian besar gen spesifik yang tidak diketahui (Hiort 2002).

  1. TIPE RAMBUT

Folikel rambut pada manusia cukup berbeda dengan jenis rambut yang ditemukan pada hewan. Namun, meskipun struktur folikel rambut dasar manusia tetap sama, jenis rambut yang dihasilkan bisa sangat berbeda. Manusia memiliki beberapa jenis rambut yang dapat diklasifikasikan tergantung pada posisi dan bentuk tubuh. 

Umumnya terdapat tiga jenis rambut yang berbeda. Mereka didasarkan pada panjang dan diameter folikel rambut di kulit dan disebut lanugo, vellus dan terminal. Lanugo adalah jenis rambut yang dihasilkan dalam siklus pertama dari pertumbuhan rambut ketika folikel rambut memasuki tak lama setelah berkembang dalam embrio. Rambut lanugo halus dan lembut, dan tumbuh di seluruh tubuh bayi dan berfungsi utama untuk mempertahankan panas tubuh. Mereka semua tumbuh pada tingkat yang sama dan begitu juga sama panjang.

Sekitar bulan ke delapan, pertumbuhan rambut ini biasanya gudang dan sering generasi kedua dari rambut lanugo kemudian mulai tumbuh dan berlangsung sampai tiga atau empat bulan hidup rahim ekstra selesai. Ini kemudian digantikan oleh vellus rambut. Kadang-kadang salah disebut sebagai rambut lanugo, rambut vellus biasanya pendek, lembut,  tidak berpigmen. Rambut vellus jauh lebih lembut daripada lanugo dan tumbuh di sebagian besar tempat di tubuh manusia pada kedua jenis kelamin. Panjang rambut ini biasanya kurang dari dua sentimeter dan folikel tidak terhubung ke kelenjar sebasea. Rambut vellus juga hadir pada pra-remaja (Tanner tahap 1). Rambut terminall merupakan perkembangan rambut yang umumnya lebih panjang, kasar, tebal, dan lebih gelap daripada rambut vellus. Fase pertumbuhan rambut terminal lebih jelas di rambut vellus dan umumnya memiliki fase anagen yang lebih lama. Rambut terminal mengandung folikel rambut yang besar dan kadang-kadang, medulla. Selama pubertas banyak folikel rambut di daerah kemaluan, ketiak, kaki, dada dan wajah.

Rambut terminal dapat dibagi lagi ke dalam jenis yang berbeda tergantung pada sumber dan / atau posisi pertumbuhan pada tubuh mereka. Berbagai jenis rambut terminal seperti rambut alis, bulu mata, rambut kepala, janggut, rambut kemaluan dan rambut peri-anal.

      Tabel 2. Organ dan jaringan yang mengekspresikan antigen ABH

Tipe rambut terminal

Rambut alis adalah rambut pelindung di atas mata. Rambut alis  membuat mata bebas dari keringat dan cairan lain dan membantu mengurangi silau setiap sinar matahari berlebihan memasuki mata. Serat rambut mengandung medulla yang melengkung dan kasar. Rambut alis dianggap memiliki salah satu tingkat pertumbuhan paling lambat dari setiap jenis folikel rambut yang ditemukan pada tubuh manusia. Rambut bulu mata sangat mirip dengan rambut alis. Tingkat pertumbuhannya sama dengan alis. Bulu mata sangat penting dalam melindungi mata dari debu dan kotoran. Rambut kepala umumnya terdiri dari rambut terminal yang tumbuh dalam pola searah jarum jam di atas kepala dan menjauhi wajah sekitar telinga dan punggung bawah kulit kepala. Tingkat pertumbuhan sedikit lebih cepat pada wanita dibandingkan laki-laki. Rambut kepala biasanya rambut terpanjang pada tubuh manusia dan ditandai  memiliki diameter seragam. Pertumbuhan jenggot merupakan respon terhadap testosteron / hormon steroid selama masa pubertas pada laki-laki dimana tebal, kasar dengan penampang segitiga.

Karakteristik lain meliputi pelebaran medulla dan potongan seperti pisau cukur. Folikel rambut dari janggut merupakan produsen tercepat rambut. Rambut pada tungkai kaki lebih pendek, dengan bentuk seperti – busur dan sering terkelupas atau meruncing di ujung. Pigmen pada rambut tungkai umumnya granular dalam penampilan, dan medula biasanya terputus. Rambut kemaluan adalah jenis rambut terminal yang biasanya berpigmen, pendek, tebal, kasar dan keriting. Rambut kemaluan sangat berbeda dari kepala rambut dimana bentuknya bulat, sedangkan kepala rambut oval. Rambut pubis memiliki variasi diameter yang cukup besar dan sering memiliki medulla terputus. Periode pertumbuhan rambut kemaluan sangatlah pendek dan dalam waktu enam bulan folikel rambut mati dan rambut rontok. Oleh karena itu, rambut kemaluan tidak pernah mendapat kesempatan untuk tumbuh lagi. Meskipun tidak banyak yang diketahui tentang rambut perianal, umumnya sepakat bahwa rambut perianal adalah rambut terminal sekitar anus. Rambut peri-anal dibedakan dari jenis rambut lain di sekitarnya berdasarkan ukuran dan kelenjar sebasea ukuran besar yang terkait.

  1. BAHAN BUKTI KRIMINAL

Pemeriksaan yang teliti dari rambut menentukan nilai penyidikan yang berharga seperti cara tindak kejahatan dan sebab kematian. Munurut “Locard’s priciples of exchange”, bulu binatang dapat ditentukan pada tubuh manusia dan sebaliknya seperti pada kasus bestiality. Demikian pada kasus pemerkosaan dan  kejahatan seksual lainnya, rambut kemaluan dari pelaku kejahatan dapat ditemukan pada tubuh si korban maupun sebaliknya.

Pada kasus-kasus kejahatan seksual, rambut kemaluan harus disisir untuk mengumpulkan rambut si pria.  Perlukaan pada rambut memberikan perubahan-perubahan khas. Luka pada kepala umpamanya, dapat merusak rambut kepala sewaktu mendapat pukulan dan indikasi untuk ini dapat dilihat dengan ruptur pada lapisan korteks, rambut dapat terbakar atau hangus selama luka bakar atau luka tembak.  Rambut yang hanggus  membengkak, hitam,  rapuh,  terpelintir atau berkeriting dan mempunyai bau tertentu akibat pembakaran keratin. Zat korban dapat ditemui di sini.

Pada pemeriksaan mikroskopik dapat dilihat :

Lebarnya rambut yang terbakar adalah lebih besar  dari normal dan memberikan gambaran-gambaran vakuolisasi. Ujung rambut dapat memberikan  keterangan cara rambut terlepas. Pangkalan rambutan biasanya bulat, tetapi bila dicabut secara paksa akan mendapat ruptur dari “sheath” rambut dan bentuk  pangkal rambut (bulb) menjadi irreguler.

Gambar 2. Akar rambut yang ditarik dengan tidak ditarik

Rambut kepala yang sehat dapat mengangkat tubuh korban dan kulit kepala dapat  tercabut dari tengkorak kepala. Rambut yang jatuh sendiri akarnya atrofi dan “sheath” akar menghilang. Rambut yang dipotong menunjukkan ujung yang terpotong tajam. Sesudah seminggu menjadi empat persegi, sesudah dua minggu  menjadi halus dan sesudah satu bulan menjadi bulat kembali.

Pada kasus-kasus pembunuhan, beberapa nilai rambut pelaku kejahatan sering  tergenggam oleh si korban. Ini membantu identifikasi si penjahat. Adanya rambut yang ditemui pada senjata memberikan hubungan antara senjata dan korban.

Pemeriksaan yang teliti diharapkan benar untuk mendeteksi adanya rambut untuk menunjukkan penyerangan oleh pelaku. Hendaknya diteliti pula adanya lumpur, bercak semen, bercak darah dan bercak ludah. Lumpur yang ditemui di kepala  menunjukkan adanya pengumpulan, adanya cairan mani menunjukkan kematian asfiksi.

Pada kasus keracunan, terutama logam, seandainya orang itu tidak dapat  segera mati, zat racun pada rambut masih dapat ditemui untuk waktu tertentu.  Pada kasus ini pemeriksaan kimiawi dapat menentukan adanya racun pada  orang hidup maupun adanya penggalian jenazah.

Untuk itu rambut harus diperiksa dengan akar-akarnya, sebaiknya dengan  bantuan pinset. Minimal dibutuhkan 15 helai rambut. Dengan cara menganalisa  panjangnya rambut dari pangkal sampai ujung rambut dapat ditaksir dosis Arsen.

  1. SAAT SEJAK KEMATIAN

Rambut berhenti tumbuh sejak kematian, tetapi disebabkan pengerutan kulit, dapat ditemui pertumbuhan rambut pada muka. Angka pertumbuhannya adalah 0,4 mm/hari.

Dengan demikian dapat ditentukan lamanya orang itu meninggal, seandainya waktu sesudah dicukur terakhir kali diketahui. Pelepasan rambut terjadi 48-72 jam sesudah meninggal, disebabkan proses pembusukan.

Jenazah  yang dikubur dalam liang yang dangkal akan mengalami perubahan warna rambut kepala dalam waktu 1-3 bulan. Jenazah yang dikubur dalam liang lahat lebih dalam akan mengalami perubahan kepala 6-12 bulan.

  1. PEMERIKSAAN

Prosedur untuk pengelompokan ABO pada rambut (Metode Absorpsi Elusi)

Prosedur pengelompokan darah pada rambut saat ini merupakan metode pemeriksaan rutin di laboratorium ilmu forensik dengan prosedur sebagai berikut :

  1. Mengumpulkan 4,5-6,0 cm panjang sampel helai rambut.
  2. Cuci rambut secara menyeluruh dengan sabun dan bilas dengan air suling, etanol dan eter.
  3. Bungkus rambut dengan kertas lilin dan hancurkan dengan roller rambut, atau hancurkan rambut dengan plat stainless stell pada tekanan 350-450 kg / cm2
  4. Potong rambut yang hancur menjadi segmen kecil dari ukuran 3 sampai 5 mm dengan pisau cukur.
  5. Bagilah segmen rambut sama menjadi tiga tabung kecil.
  6. Tambahkan satu tetes (50 ul) anti-A, anti-B dan anti-H sera (agglutinin titer = 128-256) di setiap tabung reaksi.
  7. Inkubasi campuran pada 20֩ C selama 4 sampai 18 jam.
  8. Buang antisera berlebih menggunakan aspirator dengan tabung hisap berpori dalam kotak pendingin pada 4֩ C.
  9. Cuci segmen rambut dengan garam fisiologis dingin (sekitar 5-7 ml) sebanyak dua kali.
  10. Setelah pencucian kedua, pipet garam fisiologis dingin.
  11. Tambahkan satu tetes garam fisiologis untuk setiap tabung reaksi.
  12. Inkubasi campuran dalam bak air pada 55C selama 10 menit untuk mengelusi antibodi absorbsi.
  13. Tambahkan satu tetes 0,2% suspensi sel darah merah segar golongan darah A, B dan O di setiap tabung dengan agitasi lembut.
  14. Biarkan tabung pada suhu kamar selama 1 menit dan centrifuge kemudian pada 1500 rpm selama 1 menit.
  15. Membaca ada tidaknya aglutinasi pada cermin cekung.

Metode PCR (Polymerase Chain Reaction)

ABO genotip pada spesimen forensik bernilai besar ketika tes serologi tidak tersedia, misalnya, untuk mengidentifikasi tubuh dan golongan darah menggunakan cairan tubuh dari non sekretor tersebut. Selain itu, jika kita bisa meningkatkan protokol PCR metode genotip molekul yang sering memakan waktu dan membutuhkan isolasi langkah DNA awal yang memerlukan penggunaan perlengkapan atau reagen mahal, ABO genotip akan digunakan jauh lebih efektif dengan mudah dan kuat. Literature ini menggambarkan metode genotip ABO yang cepat dan kuat langsung menggunakan darah, rambut dan cairan tubuh segar tanpa ekstraksi DNA sebelumnya. Menggunakan instrumen PCR cepat dan polimerase optimal, metode yang menggunakan set primer spesifik – alel multipleks – dapat dilakukan sekitar 70 menit mulai dari koleksi sampel hingga desain alel.

Proses ini melibatkan desain label primer, buffer untuk melaksanakan reaksi, dan alat yang digunakan untuk pemanasan dan pendinginan campuran untuk memperkuat urutan deteksi. Menggunakan PCR dari golongan darah ABO fenotipe dengan desain primer untuk setiap alel akan memungkinkan kita untuk melakukan penentuan golongan darah tanpa menggunakan sampel darah. 

Penanda genetik terlihat pada DNA dan dapat digunakan untuk mengidentifikasi gen, dan single nucleotide polymorphisms (SNPs) juga dapat digunakan untuk mengidentifikasi genotipe atau lokasi gen yang menyebabkan gangguan tertentu. 

Elektroforesis gel adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan dan melihat makromolekul, seperti DNA, RNA, dan protein. Selama elektroforesis gel, makromolekul dimuat ke gel yang terbuat dari agarose. Kemudian arus diterapkan di seluruh gel. Hasilnya adalah pemisahan makromolekul, berdasarkan massa mereka, yang diamati di band terlihat. 

Golongan darah ABO pertama kali diidentifikasi pada tahun 1900 dan melayani peran penting dalam bidang medis untuk transfusi darah, transplantasi organ dan prosedur lainnya. Fenotip mengacu antigen pada permukaan sel darah merah, tubuh memproduksi anti antibodi untuk antigen seorang individu untuk memiliki reaksi imun terhadap sel darah jenis lain. 

Lokus ABO, yang terletak di kromosom 9, berisi 7 ekson yang memiliki lebih dari 18 kb DNA genomik. Ekson 6 dan 7 adalah yang terbesar dari himpunan. Dalam kasus alel O, jika dibandingkan dengan alel A, ekson 6 kekurangan nukleotida yang mengakibatkan kurangnya aktivitas enzimatik. Ini sebabnya kami dapat mengidentifikasi jenis darah dengan menggunakan hanya ekson 6 dan 7. 

Ada juga subkelompok terdiri dari mutasi dan kombinasi heterozigot, dimana kita dapat mengidentifikasi menggunakan PCR. Alel A memiliki dua sub kelompok A1 dan A2, alel B tidak memiliki sub kelompok, dan alel O memiliki 2 sub kelompok, O1 dan O2. 

                           Tabel 3. Macam macam golongan darah manusia

Diuji seratus sampel DNA genomik dengan urutan ABO diketahui. Sampel DNA serial diencerkan (1 ng, 500 pg, 250 pg, 125 pg, 60 pg dan 30 pg) DNA standar 9947A (Promega, Madison, MA, USA) digunakan untuk mendeteksi sensitivitas dari alel multipleks – PCR spesi

Gambar 4.  Seleksi SNP dari lokus ABO

Gambar 5. Skema protokol PCR pada pengelompokkan darah ABO

Reaksi PCR : Satu ul darah segar atau akar rambut langsung ditempatkan dalam campuran reaksi PCR. 1,2 mm diameter darah atau air liur digunakan setelah dicuci dua kali dengan 20 ul air mengalir pada suhu 50°C selama 3 menit. Jumlah reaksi 20 ul terkandung 4.0 ul  5X Phire Reaksi buffer (Finnzymes, Espoo, Finlandia), 2,5 U Phire Hot Start DNA Polymerase (Finnzymes), masing-masing dNTP pada 200 uM dan masing-masing primer berada konsentrasi yang tepat.

Prosedur siklus : 98°C 5 menit; 30 siklus dengan 98°C 5 detik, 65°C 10 detik, 72°C 10 detik; 72°C 1 menit menggunakan Veriti 96-pengatur siklus suhu (Appled Biosystems, Foster City, CA, USA)

Deteksi sistem : Alat ABI prisma 310 Genetic Analyzer, software GeneScan 3,7 dan software Genotyper 3.7 (Applied Biosystems)                                         

Gambar 6. Elektroperogram rapid direct PCR tanpa ekstraksi DNA pada tipe darah BO

Tehnik Immunohistokimia

  • Tehnik Immunoperoxide (PAP) 

Teknik immunoperoxidase (PAP) diaplikasikan pada pengelompokan darah ABO rambut kulit kepala manusia. Sampel rambut longitudinal atau cross-sectioning, sehingga mendapatkan sampel cocok untuk immunostaining berikutnya. Immunostaining ini dilakukan dengan menggunakan anti-A dan anti-B sera kelinci sebagai antibodi primer. Dengan teknik ini, pewarnaan kelompok tertentu terungkap sebagai endapan coklat tua jelas diamati dalam medulla batang rambut, dan tergantung pada ada atau tidak adanya endapan ini, golongan darah masing-masing sampel rambut yang tidak diketahui dapat ditentukan. Pada akar rambut, di sisi lain, staining positif diamati tidak hanya pada sel medula tetapi juga di beberapa sel kortikal dari zona keratogenous. Dari penelitian ini, teknik ini aman sebagai penggunaan praktis untuk pengelompokan darah ABO pada sampel rambut dengan waktu satu menit (kurang dari 3 mm).

  • Tehnik Avidin Biotin

Antigen ABH ditemukan di rambut dan sangat stabil pada penyimpanan, Yada et al mendeteksi antigen rambut menggunakan metode elusi absorpsi. Hasil ini merupakan prestasi yang valid bagi para ilmuwan forensik. Juga dikembangkan metode deteksi antigen ABH di rambut dengan metode immuno-histokimia menggunakan tehnik Avidin-Biotin-Peroksidase. Rambut diiris membujur dengan tangan di bawah mikroskop daya 20 dan dipotong kecil-kecil (masing-masing sekitar. 3 mm) sebelum menjadi sasaran prosedur pewarnaan imunohistokimia. Hal ini dilakukan dalam gelas tes kecil-tabung dengan prosedur rutin. Sejak reaksi positif dideteksi melalui mikroskopis dengan medula rambut di kepala, kemaluan dan kumis, maka sulit menentukan kelompok ABO rambut yang tidak memiliki medulla dengan metode ini. Meskipun hasil ini menunjukkan hasil tidak baik untuk praktek forensik, Miyasaka et al meneliti adanya zat golongan darah di bagian korteks rambut menggunakan metode mikroskop immuno-elektron dan telah menyarankan bahwa antigen golongan darah juga terletak di dinding bagian dalam  vakuola sel medula dan dalam matriks inter sel kortikal.

Medula rambut dari golongan darah A atau B bereaksi dengan anti A atau B dan H menunjukkan pola pewarnaan mosaik seperti yang ditunjukkan pada Gambar 7. Hal ini menunjukkan bahwa irisan memanjang rambut diperlukan untuk mendapatkan hasil yang benar oleh metode imunohistokimia

Gambar 7. Pengelompokan darah ABO pada rambut hanya dapat terdeteksi di medulla rambut menunjukkan pola mozaik

 Tabel 3. Perbedaan Metode  Pemeriksaan Golongan darah ABO

  1. MASALAH PADA PENGELOMPOKAN ABO PADA RAMBUT

Dalam kebanyakan kasus, sampel rambut dikumpulkan dari TKP telah mengalami banyak kerusakan. Untuk melaksanakan pengelompokan darah sampel rambut ini, kondisi pemeriksaan harus dipertimbangkan. Seperti pretreatment rambut, penghancuran rambut, pemilihan antiserum, pencuci antibodi berlebih, elusi antibodi khusus terserap dan konsentrasi sel indikator. 

Teknik pemeriksaan rutin telah dijelaskan, tetapi harus secara teknis dimodifikasi sesuai dengan kondisi sampel. 

Jumlah sampel, perawatan rambut, kontaminasi oleh tanah atau air, dan pemanasan didefinisikan sebagai kondisi sampel. Perlu ditekankan bahwa ada batasan untuk kemungkinan menentukan golongan darah dari jumlah yang sangat kecil dari sampel dan dari orang-orang yang sangat terpengaruh.

Dari sudut pandang ini, beberapa aspek teknis untuk metode penggunaan rutin dijelaskan.

11A. Terbatasnya jumlah sampel rambut

Jumlah sampel rambut yang dibutuhkan untuk mendapatkan hasil yang akurat dalam pengelompokan darah dengan teknik penyerapan-elusi diselidiki oleh Yada et al. Dalam penyelidikannya, terdapat rambut kulit kepala dengan empat panjang yang berbeda (3.0, 4.0, 6.0 dan 9.0 cm) diperiksa, masing-masing kelompok mengandung rambut kulit kepala dari diameter yang berbeda (30, 50, 70 dan 100 um). 

Hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah rambut sampel untuk pengelompokan darah tidak hanya tergantung pada panjang rambut tetapi juga pada diameternya.  Dengan sampel rambut dari diameter 70 um, pengelompokan darah berhasil,  dengan segmen panjang 4.5 hingga 6.0 cm digunakan untuk pengujian. Dengan rambut tipis diameter dari 30 sampai 50 um seperti dalam kasus anak-anak, diperlukan sampel rambut sekitar 9 cm. Sebaliknya, dengan rambut tebal sekitar 100 um atau lebih, hanya diperlukan sampel rambut cukup dari 3 cm. 

Secara umum, diameter rambut kulit kepala Kaukasian adalah sekitar 50 sampai 80 um,  lebih tipis dibandingkan Mongoloid seperti Jepang, Cina dan Korea. Oleh karena itu, dalam pengelompokan darah rambut, perlu untuk mengambil sampel lebih lama pada rambut Kaukasian dibandingkan rambut Mongolia. Misalnya, 9 sampai 12 cm dari rambut kulit kepala dengan diameter 80 um, atau sekitar 15 cm dari rambut dengan diameter 50 um adalah jumlah rambut yang cukup memberikan hasil yang memuaskan seperti yang ditunjukkan pada tabel 8.

Gambar 8. Penampang melintang rambut

Tabel. 4. Perbedaan rambut dari berbagai ras

11B.  Sampel rambut yang berasal dari sumber yang berbeda

Rambut manusia diklasifikasikan ke dalam rambut kulit kepala, rambut kemaluan, rambut ketiak, bulu dada, kumis, jenggot, alis dan bulu mata tergantung pada situs anatomi. Secara umum, kemaluan dan rambut ketiak lebih tebal dari rambut kulit kepala dan pengelompokan darah lebih mudah di bekas rambut seperti yang ditunjukkan pada tabel 9. Dalam kasus rambut pendek seperti alis, empat atau lima rambut tunggal setidaknya diperlukan untuk pengelompokan darah tersebut. Hal ini sangat mungkin untuk mendeteksi golongan darah dari alis tunggal.

Dengan kulit kepala rambut dari janin dan bayi baru lahir pengelompokan darah praktis dengan akurasi yang sama seperti pada orang dewasa. Dengan rambut kulit kepala abu-abu juga memungkinkan untuk mendeteksi golongan darah dalam banyak cara yang sama seperti di rambut hitam.

11C. Efek dari perawatan rambut pada pengelompokan darah

Rambut kulit kepala manusia, terutama rambut wanita, sering dilakukan pengecatan, keriting bergelombang dan di bleaching. Perawatan tersebut dilakukan dengan berbagai reagen kimia. Oleh karena itu dapat dipikirkan bahwa reagen kimia ini akan memberikan efek yang kurang baik pada pengelompokan darah rambut. Dalam tabel 10 menunjukkan pengelompokan darah rambut yang berbeda diperlakukan. 

Ditemukan bahwa perawatan rambut seperti waxing permanen, pemutihan dan pengecatan tidak memiliki efek menguntungkan pada pengelompokan darah rambut, bahkan setelah perawatan berulang-ulang.

Rambut mengandung zat golongan darah, yang dapat ditentukan oleh elusi penyerapan teknik aglutinasi dicampur dengan akurasi 100 % [bahkan pada rambut nonsekretor, dan rambut di bleaching]. Penyerapan-inhibisi adalah metode kurang memuaskan.

(1) Pengelompokan ABO mungkin dengan batang rambut tunggal

(2) Teknik yang digunakan elusi penyerapan

(3) Pengelompokan ABO mungkin dari rambut janin dan bayi baru lahir

(4) Mengelompokkan tidak mungkin pada :

(i) rambut terletak di tanah atau air selama lebih dari 6 bulan,

(ii) rambut terbakar (fitur identifikasi lain dari rambut).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  

 

 

Leave a comment

Filed under tropikal infeksi

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s